【医学论文】6种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定

摘 要：采用生长速率法进行了6种化学杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定，结果表明：参试的6种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌茵丝抑制效果差异很大，代森联的抑菌效果最佳，抑制中浓度(EC50)为2.680μg/ml；波尔多液的抑菌效果最弱，EC50为322.290μg/ml；其它四种杀菌剂恶唑菌铜、福美双、代森锰锌、丙森锌的EC50依次为3.270μg/ml、4.150μg/ml、19.930μg/ml、203.078μg/ml。

关键词：杀菌剂；南丰蜜桔黑斑病菌；毒力

1.2.1干热灭菌玻璃器皿

将做好棉塞的试管、洗净干燥后的培养皿、容量瓶等玻璃仪器先用牛皮纸或报纸包好，放入干燥箱，关上箱门，接通电源，然后将温度调至165℃左右。当温度升至设定温度时开始计时（此期间要注意T变化，尽量使160℃≤T≤165℃,不能超过170℃），恒温1.5小时后可关闭电源。由于电热恒温干燥箱内温度很高，故不可立即打开箱门，须在箱门上写上注意事项，防止别人打开。温度降至室温时可打开，开箱前要先读温度计的数值。

1.2.2 制作PDA培养基

称取洗净削皮的马铃薯200克、17~20克琼脂、10~20克葡萄糖备用。马铃薯切成小块装入烧杯，琼脂剪碎装入烧杯，两烧杯分别加入500毫升蒸馏水并进行水浴加热。马铃薯煮烂时用干净的双层纱布进行过滤，滤液与溶解的琼脂混合，加入葡萄糖，混匀用蒸馏水定容至1000毫升。将做好的培养基分装到试管或锥形瓶中，用牛皮纸包好，待湿热灭菌用[3]。

1.2.3 湿热灭菌

锅底先加水至环形管水平，放上铝锅，锅内摆放需灭菌的仪器（其中包括盛有培养基的试管及锥形瓶、装有蒸馏水的锥形瓶、洗净包好的酒杯等）。最好在上层覆盖一些报纸吸水，从而使仪器的包装纸尽量保持干燥。盖上锅盖，旋阀门时两手对称同时均匀用力，关上放气阀。温度升至108℃时打开放气阀，降到0℃时关上放气阀（重复此操作一次）。温度上升至121℃时开始计时，通过电源开关控制121℃≤T≤126℃,30分钟后关闭电源。当温度降低至0℃时打开放气阀，放完气即可开锅。不可等它完全冷却，否则很难打开。

1.2.4  6种供试杀菌剂对黑斑病菌的抑菌效果测定

    采用菌丝生长速率法[4]测定6种药剂对南丰蜜桔黑斑病菌生长的抑制效果。每种杀菌剂各称取5克，用无菌水配制成0.1g/ml，依次取1ml药液加入到9ml灭菌水中摇匀后,分别量取1ml倒入培养皿（每皿中有9ml温度降至50℃左右的灭菌培养基），摇匀制成PDA[4] 含药平板培养基。每种杀菌剂稀释100×、1000×、10000×、100000×、1000000×、10000000× （浓度分别为10000，1000，100，10，1，0.1μg/ml）6个浓度梯度，另设以不含药剂培养基为对照，每个浓度重复3次。在无菌条件下，将平板培养基的柑橘黑斑病菌用直径为7mm的打孔器取相同菌龄的菌饼，然后将菌饼用接种针接入带药的培养基中央，设不含药培养基为对照，在25℃的气候箱中培养，10天后，用十字交叉法测量各菌落直径，计算药剂浓度对黑斑病菌生长的抑制率，求出毒力回归方程，计算药剂抑菌有效中浓度EC50。

生长抑制率=[（对照组菌丝净生长量－处理组菌丝净生长量）/对照组菌丝净生长量]×100%

1.2.5 数据统计

根据不同浓度的药剂处理对菌落的生长抑制结果（见表2），对表2进行一元回归统计分析，以浓度的对数值为x，以抑菌率的几率值为y值，得出表3的毒力回归方程,并求出EC50和各自的相关系数。相关系数是回归模型中用来衡量两个变量之间相关程度的指标，所以获得相关系数后应进行相关系数检验，确定显著水平与自由度后，查相关系数临界表，找到相应的相关系数临界值,若求得的相关系数的绝对值大于显著水平为0.01的相关系数临界值,一般认为回归方程是高度可信的;若大于显著水平为0.05的相关系数临界值,则认为回归方程是可信的；若小于显著水平为0.1的相关系数临界值则不可信,不能作为预测模型。

2 结果与分析

2.1  6种杀菌剂对柑橘黑斑病菌的抑制作用

从表2可知，6种杀菌剂在各浓度梯度下对黑斑病菌均有一定的抑制作用。当用最大浓度10000μg/ml处理时，80%代森锰锌、68.8%恶唑菌铜锰锌、70%代森联对黑斑病菌抑菌率高达100%； 80%波尔多液的抑菌率最低，为78.1%。

同时，随药剂浓度的降低，抑菌率呈下降趋势。以浓度从10000μg/ml稀释至10μg/ml为例， 70%甲基硫菌灵福美双抑菌效果变化最小，下降39.2个百分点，68.8%恶唑菌铜锰锌次之为40.2个百分点，70%代森联和80%代森锰锌分别为42.1个百分点和60.7个百分点，70%丙森锌的抑菌效果下降最明显，抑菌率下降了69.5个百分点。